Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi dan membandingkan tingkat cemaran Escherichia coli pada daging burger yang dijual di kaki lima di Desa Kopelma Darussalam dan restoran cepat saji di Banda Aceh. Metode yang digunakan adalah metode Most Probable Number (MPN) yang terdiri dari tes perkiraan (Presumptive Test), tes penegasan (Confirmative Test) dan tes pelengkap (Completed Test). Sampel penelitian ini adalah daging burger dari 5 penjual burger kaki lima di Desa Kopelma Darussalam dan daging burger dari 5 restoran cepat saji di Banda Aceh dengan teknik pengambilan sampel menggunakan metode total sampling. Pengambilan sampel dilakukan tiga kali dengan interval waktu 1 minggu. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada pengambilan pertama didapatkan cemaran E. coli pada 40% sampel daging burger penjual kaki lima dan 60% sampel daging burger restoran cepat saji. Pada pengambilan kedua diperoleh 100% sampel daging burger penjual kaki lima dan sampel daging burger restoran cepat saji tercemar E. coli. Pada pengambilan ketiga didapatkan 100% sampel daging burger penjual kaki lima dan 80% sampel daging burger restoran cepat saji tercemar E. coli. Hasil positif pada sampel yang diperoleh tidak memenuhi syarat berdasarkan Kepmenkes RI No. 1098/Menkes/SK/VII/2003. Nilai rata-rata MPN E. coli pada sampel daging burger penjual kaki lima lebih tinggi dibandingkan dengan sampel daging burger restoran cepat saji. Kata Kunci: Escherichia coli, daging burger, penjual burger kaki lima, restoran cepat saji, Most Probable Number