Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui daya tahan hidup spermatozoa berbagai jenis ayam dalam pengencer NaCl fisiologis. Penelitian ini dilaksanakan dari bulan November 2014 sampai Oktober 2014 di Laboratorium Reproduksi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh. Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap (RAL). Semen yang digunakan diperoleh dengan cara masase dari tiga jenis ayam jantan (ayam kampung, ayam kate dan ayam bangkok) kemudian dilakukan evaluasi secara makroskopis dan mikroskopis. Semen-semen yang berkualitas baik selanjutnya diencerkan dengan NaCl fisiologis, disimpan pada suhu ruang dan dilakukan pengamatan setiap 30 menit hingga motilitas mencapai 40%. Hasil penelitian dianalisis menggunakan analisis varian (ANAVA). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa daya tahan hidup spermatozoa berbagai jenis ayam tidak berbeda nyata (P>0,05) dengan rata-rata KI (ayam kampung), K2 (ayam kate), dan K3 (ayam bangkok) masing-masing adalah 80 ± 36,64 menit; 100 ± 17,32 menit dan 140 ± 17,32 menit. Kesimpulan dari penelitian ini adalah jenis ayam tidak berpengaruh terhadap daya tahan hidup spermatozoa dalam pengencer NaCl fisiologis.