Es batu merupakan salah satu produk pangan hasil pembekuan air minum yang memiliki suhu rendah dimana aktivitas mikroba dapat menurun atau berhenti. Hal ini menimbulkan anggapan bahwa es batu relatif aman dikonsumsi. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa terdapat kandungan Escherichia coli yang cukup banyak pada es batu di beberapa tempat di Indonesia. Penelitian ini bertujuan untuk menilai kualitas es batu di kota Banda Aceh ditinjau dari keberadaan Escherichia coli. Jenis penelitian ini adalah deskriptif melalui observasi laboratorium dengan menggunakan metode MPN (Most Probable Number), sampel penelitian ini adalah es kristal dan es balok yang diperoleh dari pabrik-pabrik es di Kota Banda Aceh. Pemeriksaan meliputi uji penduga, uji penguat dan uji pelengkap. Serangkaian uji lanjutan meliputi pewarnaan Gram dan uji biokimia dengan menggunakan uji IMViC (Indol, Methyl Red, Voges Proskauer, Citrate). Hasil pemeriksaan menunjukkan bahwa sampel es kristal pada pengambilan I, II, dan III diperoleh E. coli sebanyak 15/100 ml sampel, 5/100 ml sampel dan 21/100 ml sampel. Begitu juga sampel es balok pada pengambilan I, II, dan III diperoleh E. coli sebanyak 8,8/100 ml sampel, 38/100 ml sampel, dan 8,8/100 ml sampel. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa kualitas es batu di Kota Banda Aceh tidak memenuhi syarat air minum sesuai dengan permenkes No.492/MENKES/PER/IV/2010. Kata kunci: Es batu, MPN, Escherichia coli