ABSTRAK Pemisahan spermatozoa merupakan salah satu upaya efisiensi dalam mengubah rasio spermatozoa pembawa kromosom X dan Y. Teknik pemisahan yang dilakukan adalah metode swim up dan kombinasi swim up dan aside migration. Metode pengambilan semen menggunakan vagina buatan, kemudian dilakukan pemeriksaan mikroskopis dan makroskopis, apabila menunjukkan hasil yang baik dilanjutkan dengan pengenceran dalam media Na sitrat dan dilakukan pemisahan. Terdapat tiga perlakuan dalam penelitian ini yaitu (P0): spermatozoa kambing tanpa pemisahan spermatozoa, (P1): spermatozoa kambing yang dipemisahkan dengan swim up selama 5 menit, (P2): spermatozoa kambing yang dipemisahkan dengan aside migration selama 5 menit, (P3): spermatozoa kambing yang dipemisahkan dengan kombinasi swim up dan aside migration selama 5 menit dengan pengulangan masing-masing sebanyak lima kali. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa persentase spermatozoa Y dan spermatozoa X kambing kacang setelah pemisahan dengan metode swim up, aside migration dan kombinasi swim up dan aside migration menunjukkan perbedaan yang nyata (P