ABSTRAK Penelitian ini bertujuan mengetahui validitas kit ELISA komersial testosteron (EIA 1557, DRG diagnostic GmbH, Germany) secara analitik dan biologis untuk menganalisa konsentrasi metabolit hormon testosteron dan hubungannya dengan lingkar skrotum, umur, dan bobot badan pada kerbau. Sampel feses dikoleksi dari 34 ekor kerbau terdiri dari 22 ekor kerbau jantan dewasa (3-4 tahun), 6 jantan anakan (< 1 tahun), dan 6 ekor betina dewasa (3-4 tahun). Sampel feses kemudian diekstraksi dan metabolit hormon testosteron diukur dengan metode ELISA. Data yang didapat dianalisis menggunakan uji Pearson Correlation. Validasi analitik yang dilakukan yaitu parallelism, sensitifitas, akurasi, dan presisi, sedangkan validasi biologis dilakukan dengan membandingkan konsentrasi metabolit hormon testosteron kerbau jantan dewasa, jantan anakan, dan betina dewasa. Hasil penelitian menunjukkan kurva sampel feses paralel dengan kurva standar kit ELISA komersial testosteron (EIA 1557), sensitifitas = 0,085 ng/ml, presisi (%CV intra-assay dan inter-assay