ABSTRAK Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh kecepatan sentrifugasi pada tahap presipitasi terhadap aktivitas antibakteri dari bakteriosin produksi Lactobacillus plantarum asal usus ayam petelur yang diberikan AKBISprob. Rancangan penelitian berupa rancangan acak lengkap (RAL) terdiri dari 6 perlakuan dan 3 ulangan. Supernatan bebas sel dipresipitasi dengan sentrifugasi pada kecepatan 0xg (P0.kontrol), 3.000xg (P1), 6.000xg (P2), 9.000xg (P3), 12.000xg (P4), dan 15.000xg (P5). Prosedur penelitian yang dilakukan yaitu peremajaan isolat Lactobacillus plantarum dan preparasi supernatan bebas sel, isolasi bakteriosin L. plantarum dengan presipitasi amonium sulfat, presipitasi bakteriosin dengan sentrifugasi sesuai perlakuan dan uji aktivitas antibakteri bakteriosin pada E. coli dan B. subtilis dengan metode Kirby-Bauer. Data yang diperoleh dianalisis dengan analisis varians. Hasil penelitian menunjukkan rata-rata ±SD diameter zona hambat bakteriosin produksi L. plantarum yang diendapkan dengan kecepatan sentrifugasi berbeda terhadap E. coli adalah P0 6,20±0,18 mm; P1 6,33±0,21 mm; P2 6,50±0,50 mm; P3 6,53±0,31 mm; P4 6,68±0,60 mm dan P5 7,33±0,38 mm. Hasil uji aktivitas antibakteri bakteriosin tersebut terhadap B. subtilis adalah P0 6,63±0,13 mm; P1 7,48±0,69 mm; P2 8,95±0,30 mm; P3 9,53±0,26 mm; P4 11,88±0,79 mm dan P5 15,68±0,45 mm. Hasil uji statistik menunjukkan perbedaan kecepatan sentrifugasi berpengaruh nyata (P0,05) menghambat Escherichia coli. Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan sentrifugasi pada kecepatan 15.000xg merupakan salah satu cara terbaik untuk memurnikan bakteriosin produksi Lactobacillus plantarum. Kata kunci: Sentrifugasi, Lactobacillus plantarum, AKBISprob, bakteriosin