Tanaman Mimba (Azadirachta indica A. Juss) merupakan salah satu tanaman yang banyak dimanfaatkan oleh masyarakat sebagai obat tradisional. Penggunaan daun mimba sebagai obat tradisional alternatif perlu dikaji batas keamanannya karena belum ada laporan resmi terkait keamanan penggunaan ekstrak heksan daun mimba. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui nilai tokisitas akut, gejala klinis, gambaran mikroskopis lambung setelah pemberian ekstrak heksan daun mimba. Ekstrak heksan daun mimba diperoleh secara maserasi menggunakan pelarut n-heksan. Penelitian ini merupakan penelitian True Experimental dengan rancangan Post Test Only Control Group Design. Uji ini menggunakan 30 ekor tikus putih galur Wistar dibagi 5 kelompok (kelompok kontrol dan 4 kelompok perlakuan, tiap kelompok n=6). Kelompok kontrol diberi pakan standar dan akuades, kelompok perlakuan diberi pakan standar dan ekstrak heksan daun mimba dengan dosis 350 mg/kgBB, 700 mg/kgBB, 1400 mg/kgBB, dan 2800 mg/kgBB. Pengamatan mikroskopis lambung dilakukan setelah 14 hari pengamatan dengan cara hewan coba diberi anestesi dan dilakukan dislokasi leher lalu dibedah untuk pengambilan organ lambung. Organ tersebut diproses secara histopatologi dengan metode parafin. Pengamatan terhadap jaringan lambung dilakukan secara mikroskopis dengan mengamati deskuamasi, erosi, dan ulserasi epitel setelah pemberian ekstrak. Profil jaringan berupa data kualitatif dianalisa secara deskriptif dan jumlah kematian hewan coba digunakan untuk menghitung nilai LD50 dengan metode Weil C.S. Data pengamatan gejala toksisitas dianalisis dengan menggunakan uji Kruskal-Wallis dan menunjukkan bahwa terdapat perubahan yang signifikan pada peningkatan dan penurunan aktivitas lokomotor dan penurunan kesadaran (p = 0,000). Data pengamatan mikroskopis lambung dianalisis dengan menggunakan uji Kruskal-Wallis. Hasil analisis data menggunakan uji Kruskal-Wallis menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan signifikan pada mukosa lambung (p = 0,100). Kata Kunci: Lethal Dose 50, Gejala Toksisitas, Mikroskopis Lambung, Daun Mimba (Azadirachta indica A. Juss)