Mahkota dewa digunakan masyarakat secara empiris untuk mengobati penyakit infeksi Pseudomonas aeruginosa. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol daging buah Mahkota Dewa dalam menghambat pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa secara In Vitro. Jenis penelitian adalah eksperimen laboratorium menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan 3 kelompok perlakuan dan 2 kelompok kontrol sebanyak 5 kali pengulangan. Kelompok perlakuan terdiri dari ekstrak etanol daging buah Mahkota Dewa dengan konsestrasi 60%, 80% dan 100% sedangkan untuk kelompok kontrol digunakan larutan Carboxy Methyl Cellulose (CMC) 1%(kontrol negatif) dan antibiotik siprofloksasin (kontrol positif). Uji antibakteri dilakukan dengan metode difusi cakram. Data dianalis dengan metode Analisis of Varian (ANOVA) dan dilanjutkan dengan uji Beda Nyata Terkecil (BNT). Hasil penelitian menunjukkan terdapat zona hambat pada konsentrasi 60% (8,7 mm),80% (10,2 mm) 100% (11,3 mm) dan antibiotik siprofloksasin (26 mm). Dari hasil uji ANOVA dan BNT, tidak terdapat perbedaan yang nyata antara perlakuan 80% dengan 100% sedangkan untuk perlakuan lainnya terdapat perbedaan yang nyata antar masing-masing perlakuan. Dari hasil diatas disimpulkan bahwa ekstrak etanol daging buah mahkota dewa berpengaruh dalam menghambat pertumbuhan bakteri Pseudomonas aeruginosa dan semakin tinggi konsentrasi semakin besar pengaruh yang dihasilkan. Kata kunci: Mahkota dewa, Pseudomonas aeruginosa, antibakteri