Infeksi Saluran Kemih (ISK) adalah suatu respon inflamasi akibat masuknya mikroorganisme ke saluran kemih. Penyakit ini sebagian besar disebabkan oleh bakteri. Insiden ISK sulit dinilai secara akurat karena merupakan penyakit yang jarang dilaporkan. Penelitian ini bertujuan untuk menilai distribusi pasien ISK menurut usia, jenis kelamin dan ruang rawat, serta mengevaluasi teknik pewarnaan Gram, hitung koloni dan kultur sampel urin untuk diagnosis ISK di RSUDZA Banda Aceh. Penelitian ini diharapkan dapat memberi manfaat dalam diagnosis dan penatalaksanaan ISK. Jenis penelitian ini adalah observasional analitik dengan mengumpulkan data dari hasil pewarnaan Gram, hitung koloni dan kultur sampel urin. Hasil penelitian didapatkan bahwa dari 121 sampel terdapat 98 isolat memenuhi kriteria diagnosis ISK. Angka distribusi ISK tertinggi terdapat pada kelompok dewasa umur 19-59 tahun (50,41%), dan wanita (55%). Pasien yang banyak terinfeksi yaitu berada di ruang penyakit dalam (71%). Bakteri penyebab ISK tertinggi terdapat pada kelompok bakteri Gram negatif (87 isolat) didominasi oleh Escherichia coli. Hasil identifikasi bakteri dengan teknik pewarnaan Gram memiliki kesesuaian dengan hasil identifikasi menggunakan teknik kultur, level signifikansi 0,01 (p < 0,05). Pengukuran densitas bakteri dari pewarnaan Gram juga memiliki kesesuaian dengan densitas bakteri dari hitung koloni, level signifikansi sebesar 0,012 (p < 0,05). Kata kunci: Bakteri, infeksi saluran kemih, metode pemeriksaan urin Urinary Tract Infection (UTI) is an inflammatory response due to the entry of microorganisms into the urinary tract. This disease is mostly caused by bacteria. The incidence of UTI is difficult to assess accurately, because it is a disease that is rarely reported. This study aims to assess the distribution of UTI patients according to age, sex and ward, and evaluate the Gram staining technique, colony count and urine sample culture for diagnosis in RSUDZA Banda Aceh. The benefit of this research is expected to influence the diagnosis and management of UTI cases. This type of research is observational analytic by collecting data on Gram staining, colony count and culture from urine samples. The results showed that of 121 samples there were 98 isolates met the UTI diagnostic criteria. The highest UTI distribution rates were found in the adult group aged 19-59 years (50.41%), and women (55%). Most infected patients were in the internal medicine room (71%). Bacteria that cause the highest UTI were found in the group of Gram negative bacteria (87 isolates) dominated by Escherichia coli. The results of identification of bacteria by the Gram staining technique are in conformity with the results of identification using culture techniques, the significance level is 0.01 (p < 0.05). Measurement of bacterial density from Gram staining also corresponds to the bacterial density of the colony count, the significance level of 0.012 (p < 0.05). Keywords: Bacteria, urinary tract infections, urine examination methods