ABSTRAK Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak bunga flamboyan sebagai antioksidan alami terhadap kualitas spermatozoa sapi aceh setelah pembekuan. Semen ditampung dari 2 ekor sapi pejantan dengan umur 6-8 tahun. Penelitian dilaksanakan di Laboratorium BIB Kecamatan Saree dan BPBAP Ujong Batee. Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 6 perlakuan dan 5 ulangan yaitu P0 = 0%, 0,002% β karoten, 0,05%, 0,10%, 0,15% dan 0,20% ekstrak bunga flamboyan. Data yang diperoleh dianalisa dengan analisis varian (ANAVA) dan dilanjutkan dengan uji berganda Duncan jika berbeda nyata. Hasil penelitian menunjukkan penambahan ekstrak bunga flamboyan tidak berbeda nyata (p˃0,05) pada semua perlakuan dalam mempertahankan kualitas sperma sapi aceh setelah pembekuan. Rata-rata persentase motilitas, viabilitas, membran plasma utuh (MPU), dan abnormalitas sperma terbaik setelah pembekuan terdapat pada P1 dengan nilai masing-masing adalah 40,00%, 79,40%, 80,20% dan 10,60%. Hasil integritas DNA dengan elektroforesis gel agarosa menunjukkan tidak terjadi kerusakan DNA pada semua perlakuan. Hasil penelitian dapat disimpulkan penambahan ekstrak bunga flmboyan D. regia (0,05%) mampu meningkatkan kualitas spermatozoa selama proses pembekuan. Kata Kunci : ekstrak bunga flamboyan, β karoten, sapi aceh, tris-kuning telur, kriopreservasi, integritas DNA.