Penggunaan tumbuhan alami yang berkhasiat obat mengalami perkembangan yang pesat. Rosella (Hibiscus sabdariffa L.) mengandung sejumlah senyawa kimia yang digunakan secara luas untuk mengobati berbagai macam penyakit. Beberapa diantaranya adalah flavonoid, alkaloid, saponin dan tanin yang berfungsi sebagai antibakteri. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak bunga Rosella terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Bunga Rosella diekstraksi dengan menggunakan pelarut etanol 96% dengan metode maserasi. Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap yang terdiri dari 4 kelompok perlakuan dan 2 kelompok kontrol dengan 3 kali pengulangan. Kelompok perlakuan terdiri dari konsentrasi ekstrak 12,5%, 25%, 50% dan 75%. Kelompok kontrol terdiri dari kontrol positif (Amoksisilin 30 µg sebagai kontrol positif Staphylococcus aureus dan Kloramfenikol 30 µg sebagai kontrol positif Escherichia coli) dan kontrol negatif (akuades steril). Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi cakram Kirby-Bauer. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol bunga Rosella memiliki aktivitas antibakteri pada konsentrasi 12,5%, 25%, 50% dan 75% terhadap Staphylococcus aureus dengan diameter zona hambat rata-rata berturut-turut 13,67 mm, 17,67 mm, 22,67 mm, 25,33 mm dan terhadap Escherichia coli dengan diameter zona hambat rata-rata berturut-turut adalah 6,33 mm, 10,67 mm, 17,67 mm, 19,67 mm. Hasil analisis data dengan menggunakan Analysis Of Variance (ANOVA) dan dilanjutkan dengan Uji Duncan (P < 0,01) menunjukkan bahwa ekstrak etanol bunga Rosella memiliki aktivitas antibakteri yang sangat nyata terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dan semakin tinggi konsentrasi, semakin luas zona hambat yang terbentuk Kata Kunci: Hibiscus sabdariffa L., aktivitas antibakteri, Staphylococcus aureus, Escherichia coli.