ABSTRAK Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi bakteri Haemophilus paragallinarum pada trakhea ayam kampung (gallus gallus), dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Syiah Kuala Darussalam Banda Aceh pada bulan April-Mei 2012. Sampel yang digunakan berupa trakhea ayam kampung (gallus gallus) yang diperoleh dari 5 pasar tradisional kabupaten Bireuen. Sampel dimasukkan dalam Nutrien Broth diinkubasikan selama 24 jam pada suhu 37ºC, kemudian dibiakkan pada media agar coklat dalam keadaan CO2 10% pada suhu 37ºC. Koloni yang tumbuh pada agar coklat dilakukan pewarnaan Gram. Selanjutnya dilakukan uji katalase dan uji fermentasi (sukrosa, laktosa dan mannitol). Dengan menggunakan ose steril diambil koloni terpisah pada media Mc. Conkey agar di tanam ke Nutrien Broth dan dinkubasikan kembali selama 24 jam pada suhu 37ºC, biakan pada Nutrien Broth diambil dengan swab steril dibiakkan pada Nutrien Agar dan ditempelkan disk faktor X, V dan (X dan V). Data yang diperoleh dianalisis secara deskriptif. Hasil penelitian dari 15 sampel diperoleh 10 sampel (66%) positif Haemophilus paragallinarum dan 5 sampel (34%) negatif. Bakteri tersebut mampu memfermentasi sukrosa dan mannitol, terbentuknya zona di sekitar disk faktor X dan (X dan V), berarti bakteri ini tidak membutuhkan faktor tersebut melainkan membutuhkan faktor V untuk pertumbuhannya secara in vitro. Kata Kunci: Isolasi, Haemophilus paragallinarum, ayam kampung.