Escherichia coli merupakan salah satu penyebab diare. Banyak tumbuhan yang digunakan dalam pengobatan tradisional, salah satunya yaitu daun jarak (Jatropha curcas L.) yang berguna sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui adanya aktivitas antibakteri ekstrak metanol daun jarak terhadap pertumbuhan Escherichia coli secara in vitro. Penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 6 kelompok perlakuan dan 4 pengulangan. Metode yang digunakan adalah metode difusi dengan menggunakan cakram kertas. Kekeruhan suspensi bakteri disesuaikan dengan nilai absorbent 0,1 dari spektrofotometer. Biakan bakteri diswab merata pada Mueller Hilton Agar (MHA). Masing-masing cakram ditetesi ekstrak daun jarak dengan konsentrasi 20%, 40%, 60%, 80%, Ciprofloxacin 5 μg, dan Carboxyl Methyl Cellulose (CMC) 1% sebanyak 20 μl. Parameter yang diamati yaitu luas zona hambat yang terbentuk. Data hasil penelitian setelah dilakukan Analisis Sidik Ragam pada taraf 0,05 menunjukan berbeda nyata antar perlakuan. Kemudian, hasil uji Beda Nyata Terkecil (BNT) menunjukkan terdapat perbedaan nyata pada taraf 0,05 untuk setiap kosentrasi perlakuan. Semakin tinggi konsentrasi, semakin luas zona hambat yang terbentuk. Dan didapatkan kosentrasi 80% merupakan kosentrasi yang paling efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli.