Anemia defisiensi zat besi merupakan penyebab utama kematian serta masalah kesehatan pada ibu dan janin. Dampak yang dapat ditimbulkan antara lain, abortus, terhambatnya pertumbuhan janin, persalinan prematur, perdarahan antepartum, retensio plasenta, serta persalinan prematur. Pentingnya informasi tentang pencegahan anemia yang adekuat sehingga dapat menurunkan angka kejadian tersebut. Salah satu upaya yang dapat dilakukan adalah dengan penyuluhan kesehatan. Tujuan penelitian untuk mengetahui efektifitas dari penyuluhan kesehatan terhadap peningkatan pengetahuan, sikap, dan motivasi dalam pencegahan anemia defisiensi zat besi pada ibu hamil yang berada di wilayah kerja Puskesmas Baitussalam Aceh Besar. Jenis penelitian ini adalah experimental study dengan desain one group pre-test post-test. Teknik pengambilan sampel pada penelitian ini yaitu quota sampling berjumlah 50 responden. Pengumpulan data dilakukan pada tanggal 2 sampai 13 Juli 2019 dengan menggunakan lembar kuesioner serta analisa data menggunakan wilcoxon sign test. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penyuluhan kesehatan efektif untuk meningkatkan pengetahuan (0,000), sikap (0,000), serta motivasi (0,000) pada responden, dengan selisih mean pre-test dan post-test masing-masing sebanyak 3,02, 4,46, dan 1,86. Diharapkan kepada petugas kesehatan untuk meningkatkan penyuluhan kesehatan terkait anemia pada ibu hamil, sehingga mereka memiliki pengetahuan, sikap dan motivasi yang tinggi untuk mencegah hal tersebut.