ABSTRAK Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemisahan spermatozoa X dan Y dengan menggunakan metode swim up terhadap kualitas spermatozoa kambing PE. Pada penelitian ini digunakan 6 ekor kambing PE jantan berumur 18-24 bulan, yang ditampung semennya masing-masing 1 kali dalam seminggu dengan menggunakan elektroejakulator. Segera setelah semen didapat dilakukan pemeriksaan kualitas dan selanjutnya dibagi dalam 3 kelompok perlakuan. Kelompok 1 sebagai kontrol (P0) yaitu semen yang tidak dipisahkan dengan metode swim up. Kelompok 2 sebagai perlakuan 1 (P1) yaitu semen yang dipisahkan dengan metode swim up selama 5 menit. Kelompok 3 sebagai perlakuan 2 (P2) yaitu semen yang dipisahkan dengan metode swim up selama 10 menit. Masing-masing kelompok perlakuan di ulangi sebanyak 6 kali. Parameter kualitas spermatozoa yang diukur adalah persentase motilitas, spermatozoa hidup dan abnormalitas spermatozoa. Data yang diperoleh dianalisis dengan analisis varian (ANOVA) pola satu arah yang dilanjutkan dengan uji berganda Duncan. Hasil penelitian menunjukan rataan ± SD persentase motilitas spermatozoa masing-masing kelompok perlakuan (P0; P1; P2) secara berurutan adalah sebesar 81,33 ± 3,44%; 89,67 ± 3,21%; 90,00 ± 3,10%. Persentase spermatozoa hidup adalah sebesar 86,50 ± 2,07%; 92,33 ± 2,08%; 91,83 ± 1,72%. Persentase abnormalitas spermatozoa adalah sebesar 13,00 ± 2,53%; 7,33 ± 2,52%; 7,67 ± 2,16%. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa persentase motilitas, spermatozoa hidup dan spermatozoa abnormal setelah pemisahan dengan metode swim up berbeda secara nyata (P