Pegagan (Centella asiatica L. Urban) memiliki beberapa senyawa penting dalam penyembuhan luka yaitu alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan asiatikosida. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh salep ekstrak pegagan terhadap penyembuhan luka insisi pada mencit (Mus musculus). Penelitian ini menggunakan metode eksperimen dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dalam 3 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol positif dan kelompok perlakuan. Masing-masing kelompok berjumlah 9 mencit. Kelompok perlakuan terdiri dari salep ekstrak pegagan dengan konsentrasi 50%. Kelompok kontrol negatif diberikan salep vaselin dan kelompok kontrol positif diberikan betadine salep. Luka insisi dibuat panjang 1 cm pada bagian punggung dengan anastesi lidokain topikal. Data dianalisis menggunakan Analisis Varian (ANAVA) dan dilanjutkan dengan Uji Tuckey HSD. Hasil penelitian diperoleh bahwa rerata hari penyembuhan luka pada kontrol negatif, kontrol positif dan kelompok ekstrak pegagan konsentrasi 50% masingmasing adalah 14,00 ± 0,50; 11,33 ± 0,70; 8,66 ± 0,50. Hasil uji ANAVA (p