ABSTRAK Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri isolat bakteri asal sarang lebah madu dan uji toksisitas untuk menentukan nilai Lethal Concentration 50% (LC50) ekstrak etanol sarang lebah madu. Uji aktivitas antibakteri pada penelitian ini menggunakan bakteri uji Staphylococcus aureus dan Escherichia coli, sedangkan uji toksisitas menggunakan metode Brine Shrimp Letality Test (BSLT) pada larva udang Artemia salina dengan 5 perlakuan konsentrasi yaitu 32 ppm, 64 ppm, 126 ppm, 250 ppm, 500 ppm, dan 1000 ppm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat 8 isolat bakteri dari sarang lebah madu yang berhasil diisolasi pada media Nutrient Agar (NA). Isolat bakteri asal sarang lebah madu yang mampu menghambat pertumbuhan mikroba uji S. aureus terbaik yaitu isolat BSL4 dengan diameter zona hambat sebesar 32,6 mm, dan isolat yang mampu menghambat pertumbuhan mikroba uji E. coli yaitu isolat BSL5 dengan diameter zona hambat sebesar 27,57 mm. Uji toksisitas menunjukkan bahwa ekstrak etanol sarang lebah madu dan ekstrak bakteri asal sarang lebah madu merupakan senyawa toksik dengan nilai LC50 masing-masing sebesar 67,744 ppm dan 86,985 ppm. Kata kunci: Isolat bakteri sarang lebah madu, antibakteri, ekstrak etanol sarang lebah madu, uji toksisitas ABSTRACT This study aims to obtained the antibacterial activity of bacterial isolates from honey beehive and toxicity tests to determine the Lethal Concentration of 50% (LC50) ethanol extract of honey beehives. The antibacterial activity test in this study used Staphylococcus aureus and Escherichia coli bacteria, while the toxicity test used the Brine Shrimp Letality Test (BSLT) method on Artemia salina larvae shrimp with 5 concentration treatments were 32 ppm, 64 ppm, 126 ppm, 250 ppm, 500 ppm, and 1000 ppm. The results showed that 8 bacterial isolates from honey beehives were successfully isolated on Nutrient Agar (NA) medium. The best bacterial isolates from beehives that able to inhibit microbial growth of the S. aureus were BSL4 isolates with inhibitory zone diameter was 32,6 mm, and isolates that capable to inhibit microbial growth of E. coli were BSL5 isolates with inhibitory zone diameter was 27,57 mm. Toxicity test showed that the ethanol extract of honey beehives and honey beehives bacteria extract contained toxic compounds with LC50 value of 67,744 ppm and 86,985 ppm each. Keywords: Isolates of honey beehives bacterial, antibacterial, ethanol extract of honey beehives, toxicity test