Abstrak. Penelitian tentang Analisis Daya Hambat Ekstrak Daun Sirih Hijau (Piper betle L.) terhadap Mikroorganisme Indikator Mastitis telah dilaksanakan di Laboratorium Ilmu dan Teknologi Pengolahan Susu dan Laboratorium Analisis Pangan dan Hasil Pertanian yang dilaksanakan pada 7 September sampai dengan 10 November 2018. Penelitian ini terdiri dari 4 perlakuan dan 5 ulangan. Data yang diperoleh selanjutnya akan diolah menggunakan Rancangan Acak Lengkap, jika didapatkan hasil yang berbeda maka akan dilanjutkan dengan uji Duncan. Perlakuan R1 yaitu penambahan ekstrak daun sirih hijau 15%, R2 yaitu penambahan ekstrak daun sirih hijau 30%, R3 yaitu penambahan ekstrak daun sirih hijau 45% dan R4 yaitu penambahan ekstrak daun sirih hijau 60%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak daun sirih hijau dengan konsentrasi 15%, 30%, 45% dan 60% mampu menghambat E. coli dan S. aureus. Berdasarkan hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun sirih hijau mampu menghambat pertumbuhan E. coli dan S. aureus. Kata Kunci: Daya hambat, E. coli, S. aureus dan ekstrak daun sirih hijau