ABSTRAK Latar Belakang : Penyakit Hirschsprung’s (PH) adalah suatu kelainan bawaan berupa aganglionik usus mulai dari sfingter anal internal ke arah proksimal sampai panjang segmen tertentu, tetapi selalu termasuk anus dan sebagian rectum. Standar utama diagnosis PH adalah hasil pemeriksaan histopatologi dari biopsi rektal atau full thickness biopsy. Sebagai pemeriksaan awal dilakukan pewarnaan H&E, dijumpai perbedaan antara gejala klinis dan hasil pemeriksaan histopatologi dengan pewarnaan H&E, maka dilanjutkan dengan pemeriksaan imunohistokimia AChE. Tujuan Penelitian : Untuk mengetahui korelasi antara imunoekspresi AChE pada pasien dengan diagnosa klinis PH Metodologi, Penelitian ini menggunakan rancangan cross sectional dengan design analitik observasional, menggunakan metode korelasi koefisien kontingensi. Hasil dihitung menggunakan software SPSS 17. Hasil, Peneltian ini didapatkan 25 sampel yang terdiagnosa PH secara klinis lalu dilanjutkan imunohistokimia AChE dijumpai imuniekspresi pada 23 sampel (92%) yang PH dan 2 sampel (8%) bukan PH. Hasil uji koefisien korelasi didapatkan C=0,707 dengan P-value 0,000, yang berarti memiliki korelasi positif kuat. Kesimpulan, Pemeriksaan imunohistokimia AChE mempunyai korelasi positif kuat dalam penegakan diagnosa PH. Kata Kunci : Penyakit Hirschsprung, imunohistokimia acetylcolinesteras (AChE), pewarnaan H&E