ABSTRAK Protease dari isolat termo-halofilik Pria Laot Sabang strain A (PLS A) telah berhasil dimurnikan, dikarakterisasi, dan diaplikasikan pada penyamakan kulit sapi. Pemurnian protease dilakukan dalam dua tahap yaitu pengendapan dengan garam amonium sulfat pada tingkat kejenuhan 20-40% dan dilanjutkan dengan kromatografi kolom penukar anion DEAE-Sepharose. Karakterisasi protease murni dilakukan untuk mempelajari pengaruh suhu, pH, konsentrasi NaCl, dan variasi pelarut organik terhadap aktivitasnya. Selain itu, berat molekul protease juga ditentukan dan diaplikasikan pada penyamakan kulit sapi. Aktivitas spesifik protease hasil pengendapan amonium sulfat adalah 505,4 U/mg dengan tingkat kemurnian 6,7 kali dibandingkan ekstrak kasarnya. Aktivitas spesifik protease hasil kromatografi DEAE-Sepharose adalah 3821,33 U/mg dengan tingkat kemurnian 50,8 kali dibandingkan ekstrak kasarnya. Berat molekul protease hasil pemurnian adalah 13,6kDa dengan aktivitas optimum pada suhu 60 oC(termostabil), pH 7 (netral), konsentrasi NaCl 5M (halostabil) dan pelarut non polar (n-heksan). Protease dapat diaplikasikan pada proses perendaman dan pencucian kulit mentah dalam industri pengolahan kulit. Kata kunci : Isolat PLS A, protease, termostabil, halostabil, penyamakan kulit