Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh isolat daun Helminthostachys zeylanica terhadap penurunan kadar glukosa darah tikus. Senyawa flavonoid dari fraksi etil asetat H. zeylanica diperoleh melalui tahapan isolasi kemudian isolat diuji bioaktif secara in vivo pada tikus Rattus norvegicus yang terjangkit diabetes. Tikus dibagi kedalam 6 kelompok (tiap kelompok 5 pengulangan) yang terdiri dari kelompok A (kontrol negatif), kelompok B (kontrol positif aloksan), kelompok C (kontrol positif aloksan dan obat), kelompok D, E dan F (aloksan dan isolat dosis 8, 10 dan 12 g/kg BB). Perlakuan pada tikus selama 21 hari. Data yang diperoleh di analisis secara one way ANOVA dengan taraf signifikan 95% selanjutnya dianalisis dengan Duncan. Hasil penelitian berdasarkan uji fitokimia diperoleh senyawa fenolat. Senyawa tersebut diuji terhadap tikus diabetes pada dosis 8, 10 dan12 mg/kg BB dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus diabetes yang dibandingkan dengan obat sintetis yaitu metformin. Berdasarkan hasil dari penelitian dapat disimpulkan bahwa pada dosis 8 mg/kg BB merupakan dosis terbaik terhadap penurunan kadar glukosa darah pada tikus diabetes.