ABSTRAK Penelitian ini bertujuan memurnikan α-amilase yang dihasilkan oleh bakteri termo-halofilik isolat PLS 75, menentukan berat molekul dan mengkarakterisasi aktivitas enzim yang dihasilkan pada berbagai suhu, pH, pelarut organik. Enzim α-amilase dimurnikan dengan fraksinasi amonium sulfat dan kromatografi penukar anion (DEAE sepharose fast flow). Hasil fraksinasi amonium sulfat menunjukkan bahwa fraksi III (kejenuhan 40-60%) memiliki aktivitas spesifik tertinggi yaitu sebesar 29,6 (U/mg) dengan kemurnian 2,4 kali lebih tinggi dibandingkan dengan ekstrak kasarnya. Pemurnian lanjut fraksi III ini menggunakan DEAE sepharose fast flow menghasilkan aktivitas spesifik sebesar 134,06 U/mg dengan kemurnian 8,18 lebih tinggi dibandingkan dengan ekstrak kasarnya. Enzim murni yang dihasilkan memiliki berat molekul yang rendah yaitu 15,2 kDa. Enzim ini memiliki aktivitas optimum pada suhu 80oC dan pH 5. Keberadaan metanol yang bersifat polar dan n-heksan yang bersifat non polar dapat meningkatkan aktivitas α-amilase, namun etil asetat yang bersifat semi polar menghambat aktivitasnya. Hasil penelitian menunjukkan bahwa α-amilase yang dihasilkan isolat PLS 75 memiliki berat molekul yang rendah, bersifat termo-halostabil, aktif dalam suasana asam, dan stabil dalam pelarut organik yang bersifat polar dan non polar. Kata kunci: α-amilase, kromatografi penukar anion, PLS 75, enzim termo-halostabil. ABSTRACT The objective of this study was to purify α-amylase produced from a thermo-halophilic bacteria of PLS 75 isolate, determine molecular weight and characterize enzyme activity produced at various temperature, pH, organic solvent. The α-amylase enzyme was purified by fractionation of ammonium sulfate, followed by anion exchange chromatography (DEAE sepharose fast flow). The result of ammonium sulfate fractionation showed that fraction III (40-60% saturation) had the highest specific activity of 29.6 U/mg with a purity 2.4 times higher than the crude extract. The further purification of this fraction III using DEAE sepharose fast flow produces a specific activity of 134.06 U/mg with a purity 8.18 higher than the crude extract. The resulting pure enzyme had a low molecular weight of 15.2 kDa. This enzyme had an optimum activity at 80° C and pH 5. The presence of n-hexane and methanol increased the α-amylase activity, but the semi-polar ethyl acetate inhibited the activity. The results showed that the α-amylase produced by PLS 75 had low molecular weight, thermo-halostable, active in acidic condition, and stable in polar and non-polar organic solvents. Keywords: α-amylase, anion exchange chromatography, PLS 75, thermo-halostable enzyme