Telah dilakukan penelitian tentang isolasi dan karakterisasi senyawa flavonoid dari umbi bawang dayak (Eleutherine palmifolia Merr). Sampel yang digunakan yaitu serbuk kering umbi bawang dayak sebanyak 200 gram. Selanjutnya dimaserasi menggunakan metanol selama 3 x 24 jam. Setelah dipekatkan dengan evaporator diperoleh 12,75 gram ekstrak kental umbi bawang dayak. Ekstrak kental umbi bawang dayak positif pada uji flavonoid, hasil indetifikasi flavonoid menggunakan KLT dengan fasa diam silika gel GF254 dan fasa gerak metanol : kloroform (9:7) memberikan 1 spot berwarna kuning kecoklatan yang harga Rf noda yaitu 0,8. Analisis menunjukan adanya senyawa turunan flavonol yaitu flavonoid kuersetin. Menentukan besarnya kandungan kuersetin dengan metode HPLC. Linearitas pada konsentrasi 0,5; 2,5; 10,0 dan 20,0 mg/L memiliki koefisien korelasi sebesar 0,999. Limit deteksi metode ini adalah sebesar 0,0518 mg/L dan limit kuantifikasi sebesar 0,157 mg/L. Ketelitian yang diperoleh dari metode ini ialah 15,44%. Rerata kadar kuersetin yang diperoleh adalah 0,262531%. Analisis FTIR menunjukan umbi bawang dayak mengandung gugus fungsi C–H, C=C, C–O, C=O, O–H, C–N dan -NO2. Kata kunci: Bawang Dayak (Eleutherine palmifolia Merr), Flavonoid, High Performance Liquid Chromatography (HPLC).