Hemoglobin merupakan salah satu komponen dalam sel darah merah yang berupa ikatan antara heme (besi) dan protein globin yang berfungsi untuk mengikat oksigen dalam dalam darah, sehingga perubahan kadar hemoglobin sangat mempengaruhi kondisi tubuh. Kadar hemoglobin dapat dipengaruhi oleh banyak faktor salah satunya jenis kelamin dimana adanya perbedaan kadar hemoglobin pada laki – laki dan perempuan. Laki – laki memilliki kadar hemoglobin normal antara 13 g/dl – 17 g/dl dan perempuan mencapai 12 g/dl – 15 g/dl. Hemoglobin sebagai salah satu komponen dalam sel darah merah sangat dipengaruhi oleh jumlah sel ini dalam darah sehingga kehilangan darah seperti saat mendonor darah dapat menyebabkan penurunan kadar hemoglobin. Penelitian ini bertujuan untuk melihat adanya perbedaan kadar hemoglobin sebelum dan sesudah mendonor berdasarkan jenis kelamin pendonor. Penelitian ini dilakukan pada pendonor darah yang melakukan donor di Instalasi Transfusi Darah (ITD) RSUD dr. Zainoel Abidin. Sampel didapatkan dengan metode sampling kuota. Pengumpulan data dilakukan pada 66 sampel dengan menggunakan metode strip test berupa alat Easy Touch® GCHb Multi-Function Monitoring System untuk memeriksa kadar hemoglobin sebelum dan sesudah donor dan formulir pendaftaran donor darah untuk melengkapi data pendonor. Metode statistik menggunakan analisis perbandingan, dengan pengujian hipotesis menggunakan uji statistik t. Hasil penelitian ini menunjukkan adanya perbedaan kadar hemoglobin yang signifikan setelah mendonor baik pada pendonor laki – laki maupun perempuan. Secara umum dapat dilihat sebelum mendonor kadar hemoglobin rata – rata sebesar 14,44 g/dl dan 12,93 g/dl sesudah donor. Pada laki – laki mempunyai nilai rata – rata 15,11 g/dl sebelum donor dan 13,73 sesudah mendonor dan perempuan mempunyai nilai rata – rata 13,73 g/dl sebelum donor dan 12,13 g/dl sesudah donor. Penurunan kadar hemoglobin lebih besar terjadi pada perempuan yang mana dapat dipengaruhi oleh kebutuhan zat besi yang lebih besar serta kondisi fisiologis yang berbeda dari pada laki – laki. Analisis data yang dilakukan dengan menggunakan uji t dengan hasil nilai p 0,000 (p < 0,05). Hasil tersebut menunjukkan adanya penurunan kadar hemoglobin yang signifikan pada pendonor baik laki – laki maupun perempuan. Kata kunci : donor darah, hemoglobin, dan jenis kelamin