Bakteri selulolitik merupakan bakteri yang dapat menghasilkan enzim selulase untuk membantu hidrolisis selulosa menjadi glukosa dalam bentuk asam lemak terbang pada hewan ruminansia. Sebanyak 5 ml cairan rumen diambil dari lima ekor sapi aceh yang disembelih di Rumah Pemotongan Hewan (RPH) kotamadya Banda Aceh. Pengambilan sampel dilakukan menggunakan spuit 5 cc sebanyak tiga kali pengulangan. Bakteri selulolitik diisolasi pada media Carboxil Methile Cellulose (CMC) dan diuji skrining dengan penambahan congo red 0,3%. Koloni yang tumbuh selanjutnya dihitung dan dilakukan pewarnaan Gram. Penghitungan jumlah total bakteri menunjukkan hasil 3,7x106 CFU/ml, sedangkan pewarnaan Gram menghasilkan enam isolat bakteri Gram positif dan empat isolat Gram negatif. Isolasi DNA dilakukan untuk mendapatkan DNA murni yang bebas dari kontaminasi sehingga diperoleh DNA dengan kualitas yang baik. Proses amplifikasi menggunakan metode PCR. Hasil elektroforesis memperlihatkan pita yang terseparasi dan sejajar dengan marker. Penentuan urutan DNA dilakukan melalui jasa komersial di Macrogen Inc., Korea. Penjajaran menggunakan program BLASTN. Pohon filogenetik dikonstruksi menggunakan program MEGA 7.0. Hasil sekuensing berupa kromatogram. Homologi urutan DNA sampel dengan urutan DNA yang sudah dideposit di GenBank dapat diketahui di National Centre for Biotechnology Information (NCBI) melalui situs http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Hasil penyejajaran urutan basa dengan data genbank. menunjukkan enam bakteri yang memiliki kemiripan dengan isolat sampel, yaitu S1 dengan Enterobacter cloacae strain DSM 30054 (91%), S2 dengan Lysinibacillus fusiformis (87%), S3 dengan Bacterium NLAE-zl-P676 (93%), S4 dengan Serratia marcescens strain BUMP4 (87%), S5 dengan Bacterium AM0250 (96%), dan S6 dengan Enterobacter hormaechei strain A8 (99%). Dari keenam bakteri tersebut, isolat S1 dan S2 kemungkinan adalah spesies baru. Hal ini diyakini bahwa ketika sebuah urutan memiliki kemiripan >98% dengan 16S rDNA bakteri yang diketahui, dianggap sebagai anggota spesies tersebut. Namun, jika persentasenya homologi