ABSTRAK Penelitian tentang bioaktivitas senyawaan dari ekstrak Callyspongia sp. sebagai antibakteri resisten dari bakteri Aeromonas hydrophila telah selesai dilakukan pada bulan Januari 2018 di Laboratorium Kimia Laut fakultas Kelautan dan Perikanan, Laboratorium mikrobiologi Fakultas Kedokteran, dan Laboratorium instrumen Fakultas Matematika Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Syiah Kuala. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan senyawa bioaktif dan konsentrasi optimum dari sponga laut Callyspongia sp. terhadap bakteri Aeromonas hydrophila yang bersifat antibakteri resisten. Metabolit aktif diisolasi menggunakan metode pemisahan berdasarkan bioaktivitas dengan beberapa tahapan kromatografi. Hasil interpretasi data FTIR menunjukkan adanya serapan vibrasi pada daerah bilangan gelombang 1637,4 cm-1 yang menunjukkan vibrasi gugus fungsi C-N imina yang telah dikonfirmasi oleh daerah fingerprint pada bilangan gelombang 1449,0 cm-1 sehingga mengindikasikan senyawa aktif merupakan metabolit sekunder golongan alkaloid. Hasil bioaktivitas menunjukkan pada konsentrasi 20 µg/mL menghasilkan zona hambat yang berdiameter sebesar 8,50 mm, pada konsentrasi 100 µg/mL menghasilkan zona hambat yang berdiameter sebesar 10,25 mm sedangkan zona hambat dari kloramfenikol yang berdiameter sebesar 7,25 mm. Berdasarkan hasil bioaktivitas menunjukkan bahwa metabolit aktif golongan alkaloid memiliki potensi sebagai antibakteri Gram-negatif resisten Aeromonas hydrophila. Kata Kunci: Alkaloid, Callyspongia sp., Aeromonas hydrophila, Antibakteri resisten