Hand hygiene merupakan salah satu faktor penting dalam melaksanakan pencegahan terjadinya infeksi di rumah sakit dan perawat harus melaksanakan five moment for hand hygiene karena perawat berinteraksi langsung dengan pasien selama 24 jam. Supervisi merupakan bagian dari fungsi directing (pengarahan), yang berperan untuk mempertahankan segala kegiatan yang telah diprogramkan untuk dilaksanakan dengan baik. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui gambaran pelaksanaan supervisi kepala ruang terhadap five moment for hand hygiene perawat pelaksana di ruang rawat inap Rumah Sakit Umum Daerah dr. Zainoel Abidin Banda Aceh. Jenis penelitian yang digunakan adalah deskriptif exploratif dengan desain penelitian cross sectional study. Populasi penelitian adalah seluruh perawat di ruang rawat inap sebanyak 313 responden, teknik pengambilan sampel menggunakan proporsional sampling, sehingga diperoleh 84 responden dengan alat pengumpul data berupa kuesioner. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pelaksanaan supervisi kepala ruang terhadap five moment for hand hygiene perawat pelaksana semua dalam kategori baik (94,0%). Persentase pelaksanaan supervisi kepala ruang dalam kategori baik terdiri dari teknik perencanaan (95,2%), pengarahan (98,8%), bimbingan (96,4%), motivasi (95,2%) dan evaluasi (94,0%), namun kategori kurang baik pada teknik observasi (88,1%). Rekomendasi untuk kepala ruang RSUDZA Banda Aceh hendaknya meningkatkan supervisi dengan teknik observasi terhadap pelaksanaan five moment for hand hygiene perawat pelaksana, karena pemantauan secara langsung maupun menggunakan lembar observasi dapat memastikan perawat melaksanakan hand hygiene sesuai dengan ketentuan.