Pembentukan biofilm oleh bakteri Vibrio alginolyticus menjadi masalah utama dalam penanganan vibriosis karena dapat meningkatkan resistensi terhadap antibiotik dan desinfektan. Daun kelor (Moringa oleifera) yang diekstraksi menggunakan etanol mengandung zat aktif tanin dan flavonoid yang berpotensi sebagai antibiofilm karena dapat menghambat pelekatan biofilm pada substratnya. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek ekstrak etanol daun kelor (Moringa oleifera) dalam menghambat pembentukan biofilm Vibrio alginolyticus secara in vitro. Penelitan ini menggunakan metode Microtiter Plate Biofilm Assay (OD570nm). Perlakuan yang diberikan berupa penambahan ekstrak etanol daun kelor pada konsentrasi 2%, 4%, 8% dan 10%. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun kelor mampu menghambat pembentukan biofilm. Kondisi terbaik dalam menghambat pembentukan biofilm diperoleh pada konsentrasi 10% dengan waktu inkubasi selama 60 jam dalam suhu ruang.