Tongkol jagung merupakan limbah pertanian dengan lignoselulosa tinggi dan mempunyai potensi sebagai substrat untuk dijadikan bioetanol. Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui kadar produksi bioetanol secara Simultaneous Saccharification and Fermentation (SSF) menggunakan esktrak enzim kasar ID05-609 dan ID05-832 serta yeast laut lokal. Metode yang digunakan adalah metode dinitrosalicylic acid (DNS) untuk uji aktivitas ekstrak enzim kasar, kromatografi lapis tipis untuk uji hidrolisis substrat tongkol jagung dan analisis High Performance Liquid Chromatography (HPLC) untuk SSF. Pada penelitian ini substrat yang digunakan berukuran 74 mikron. Ekstrak enzim kasar memiliki aktivitas selulase dan xilanase masing-masing 2,1496 dan 3,4163 U/mL untuk isolat ID05-832, 1,7459 dan 2,1729 U/mL untuk isolat ID05-609. Uji kromatografi lapis tipis menunjukkan bahwa produk hasil hidrolisis berupa oligosakarida. Hasil bioetanol diperoleh pada susbtrat yang ditambahkan ekstrak enzim kasar ID05-609 pada jam ke 72, yaitu 0,611 g/L. Sementara substrat yang ditambahkan dengan ekstrak enzim kasar ID05-832, kombinasi ekstrak enzim kasar dan tanpa ekstrak enzim kasar masing-masing, yaitu 0,579 g/L, 0,477 g/L dan 0,301 g/L. Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa fermentasi susbtrat tongkol jagung secara SSF menggunakan yeast laut lokal mampu menghasilkan kadar bioetanol tertinggi, yaitu 0,611 g/L.