Beberapa strain mikroorganise termo-halofilik telah diisolasi dari kawasan hot spring Pria Laot, Sabang. Skrining telah dilakukan terhadap 4 isolat, yaitu PLSA, PLS75, PLS76 dan PLS80 untuk mendapatkan dan mengidentifikasi isolat yang paling potensial menghasilkan α-amilase termostabil serta mengetahui waktu dan suhu optimum produksi α-amilase termostabil tersebut. Skrining dilakukan pada media ½ Thermus yang diperkaya 0,25% (b/v) glukosa dan 1% (b/v) pati. Isolat PLS75 adalah strain yang paling potensial menghasilkan α-amilase termostabil. Selanjutnya, terhadap isolat PLS75 dilakukan identifikasi morfologi meliputi pewarnaan Gram dan Scaning Electron Microscope. Identifikasi isolat PLS75 juga dilakukan secara molekular (analisis gen 16S rRNA). Hasil identifikasi morfologi menunjukkan bahwa isolat PLS75 termasuk mikroorganisme Gram negatif berbentuk basil berantai dengan profil sel yang seragam. Hasil analisis sekuens fragmen gen 16S rRNA menunjukkan bahwa isolat PLS75 mempunyai kekerabatan dekat dengan Uncultured organism clone ELU0055-T366-S-NIPCRAMgANa_000196. Analisis produksi α-amilase termostabil dilakukan melalui analisis kurva pertumbuhan dengan menghitung biomassa dan aktivitas enzim pada variasi suhu fermentasi (65˚C dan 70˚C). PLS75 mampu menghasilkan biomassa tertinggi (5,69 mg/mL) pada waktu inkubasi 34 jam suhu produksi 65˚C pH 7. Sementara itu, aktivitas α-amilase tertinggi (5,64 U/mL) dihasilkan pada waktu inkubasi 33 jam, suhu produksi 65˚C, pH 7. Isolat PLS75 merupakan isolat unik Pria Laot Sabang yang sulit untuk dikulturkan dan diketahui dapat memproduksi α-amilase termostabil. Kata kunci : skrining, α-amilase termostabil, analisis gen 16S rRNA