ABSTRAK Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol daun tempuyung terhadap pertumbuhan bakteri Gram negatif yang diisolasi pada beruang madu (Helarctos malayanus). Bakteri Gram negatif diisolasi dari anus beruang. Identifikasi bakteri dilakukan dengan mengkultur isolat pada media Nutrient Agar (NA) kemudian ditanam pada media Mc Conkey Agar (MCA) dan dilakukan pewarnaan Gram, uji IMVIC dan uji gula-gula. Ekstrak etanol daun tempuyung diperoleh dengan cara maserasi dengan pelarut etanol 96%. Konsentrasi ekstrak yang digunakan yaitu 20%, 40%, 60%, 80% dan 100%. Kontrol negatif menggunakan aquadest dan kontrol positif menggunakan gentamycin dengan tiga kali perulangan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa identifikasi bakteri Gram negatif didapatkan Pseudomonas sp. Kemudian pada uji aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun tempuyung dapat menghambat pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 20% (8,7 mm), 40% (10,1 mm), 60% (10,4 mm) dan 80% (9,7 mm). Sedangkan pada konsentrasi 100% (0 mm) tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri Pseudomonas sp. Konsentrasi 60% mempunyai daya hambat terbesar dengan diameter 10,4 mm dan termasuk dalam kategori kuat.