Uji aktivitas antimikrobial senyawa metabolit sekunder dari ekstrak n-heksana bunga kamboja putih (Plumeria alba) telah dilakukan. Hasil maserasi bunga kamboja putih dengan pelarut n-heksana menghasilkan ekstrak bewarna kuning dengan berat sebesar 21,06 g dengan rendemen ekstrak yaitu 2,78 %. Ekstrak n-heksana dipisahkan dengan Kromatografi Kolom Cair Vakum (KKCV) sehingga diperoleh 7 kelompok fraksi gabungan yaitu fraksi A (0,38 g), fraksi B (0,31 g), fraksi C (5,83 g), fraksi D (3,83 g), fraksi E (1,92 g), fraksi F (1,42 g), dan fraksi G (0,3 g). Ekstrak kasar dan fraksi-fraksi yang diperoleh diuji aktivitas antibakteri terhadap bakteri S. aureus dan E.coli dengan metode Kirby-Bauer menggunakan cakram dengan konsentrasi 1%, 10%, 20%, kontrol positif (kloramfenicol), dan kontrol negatif (n-heksana). Hasil uji aktivitas antimikrobial menunjukkan bahwa fraksi G memiliki potensi sebagai antimikrobial terhadap bakteri S.aureus dan E.coli dengan nilai zona hambat masing-masing pada kosentrasi 20% adalah 14,2 mm dan 9,1 mm. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa fraksi G mengandung senyawa golongan terpenoid. Kata Kunci : Kamboja putih (Plumeria alba), ekstrak n-heksana, aktivitas antimikrobial