Beberapa strain mikroorganisme termo-halofilik telah berhasil diisolasi dari kawasan sumber air panas bawah laut Pria Laot Sabang. Empat strain telah diuji potensinya untuk menghasilkan lipase yaitu PLS A, PLS 75, PLS 76 dan PLS 80. PLS 80 mampu menghasilkan lipase setelah diinkubasi pada suhu 70oC selama 24 jam, pH 9 dalam media produksi agar yang mengandung minyak zaitun, tween 80 dan rhodamin B. Aktivitas maksimum lipase tercapai pada jam ke-16 inkubasi, pH 9, suhu 70oC dengan kecepatan pengadukan 150 rpm. Aktivitas yang diperoleh sebesar 18,05 U/mL. PLS 80 merupakan mikroorganisme Gram negatif. Analisis morfologi sel menggunakan SEM menunjukkan PLS 80 berbentuk batang yang panjang yang merupakan ciri Geobacillus sp. Pohon filogenetik dibentuk untuk mengetahui kekerabatannya dengan mikroorganisme lain berdasarkan hasil sekuensing gen 16S rRNA. PLS 80 memiliki kemiripan 99% dan terletak dalam cabang yang sama dengan G. kaustophillus strain Da2. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa PLS 80 mampu menghasilkan lipase yang bersifat alkali-termostabil, mikroorganisme Gram negatif dan termasuk dalam genus Geobacillus sp. Kata kunci: Mikroorganisme termo-halofilik, lipase termostabil, lipase alkali-termostabil, Geobacillus sp.