ABSTRAK Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi bakteri Escherichia coli dan Salmonella sp pada telur ayam kampung yang gagal menetas di Laboratorium Lapangan Peternakan Universitas Syiah Kuala. Sebanyak 20 butir telur ayam kampung yang gagal menetas diperiksa di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Syiah Kuala Banda Aceh. Sampel diisolasi berdasarkan metode Carter yang dimodifikasi. Pada media Brilliance E.coli/ Coliform Selective Agar koloni bakteri tumbuh berbentuk bulat berwarna ungu, pada pewarnan Gram bakteri bewarna pink berbentuk batang pendek. Pada media SSA koloni bakteri berbentuk bulat bewarna hitam dan pada pewarnaan Gram bakteri bewarna pink berbentuk batang panjang. Hasil uji IMViC dan gula-gula sesuai dengan karakteristik Escherichia coli dan Salmonella sp. Hasil penelitian dari 20 sampel telur ayam kampung yang diteliti 3 sampel positif terinfeksi Escherichia coli dan 12 sampel positif Salmonella sp. Maka dapat disimpulkan Escherichia coli dan Salmonella sp merupakan salah satu penyebab kegagalan menetas pada telur ayam kampung yang gagal menetas di Laboratorium Lapangan Peternakan Universitas Syiah Kuala.