Telah dilakukan penelitian tentang karakterisasi fraksi etil asetat daun johar (Senna siamea lam) dan uji aktivitasnya terhadap bakteri Staphylococcus aureus. Proses ekstraksi dilakukan melalui metode maserasi 350 gram daun johar menggunakan 3 L pelarut etanol 95%, 2 L pelarut etil asetat dan 2 L pelarut n-heksan masing-masing selama 3 x 24 jam dan diperoleh fraksi etanol, fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan sebanyak 21,25; 12,26 dan 5,48 gram dengan rendemen 54,5; 31,44 dan 14,05%. Uji skrining fitokimia menunjukkan fraksi etanol dan fraksi etil asetat mengandung senyawa metabolit sekunder yang sama yaitu alkaloid, flavonoid, glikosida, polifenol, tanin dan saponin, sedangkan fraksi n-heksan hanya mengandung glikosida dan steroid. Selanjutnya fraksi etil asetat daun johar dikarakterisasi menggunakan FTIR. Hasil spektrum FTIR menunjukkan fraksi etil asetat mengandung gugus O-H, C-N, C=C, C=O, C-C, C-O, C-X dan C-H alifatik. Fraksi etil asetat daun johar dilakukan uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus menggunakan metode difusi cakram dengan konsentrasi 100, 200, 400, 600, 800, dan 1000 ppm. Hasil uji aktivitas antibakteri fraksi etil asetat daun johar paling bagus terjadi pada konsentrasi 1000 ppm mencapai 11 mm selama inkubasi 24 jam dan turun menjadi 9,33 mm setelah diinkubasi selama 48 jam.