Penelitian ini bertujuan mengetahui jenis bakteri Gram positif pada uterus sapi aceh yang mengalami repeat breeding (RB). Sampel yang digunakan adalah enam ekor sapi aceh betina yang terdiri atas tiga ekor sapi fertil (K1) dan tiga ekor sapi yang mengalami RB (K2). Pengambilan sampel bakteri dalam uterus sapi dilakukan dengan menggunakan swab steril yang dikultur dalam media nutrient broth (NB) dan diinkubasikan pada suhu 37°C selama 24 jam, selanjutnya dilakukan penanaman pada media manitol salt agar (MSA) dan media blood agar (BA) lalu diinkubasikan kembali selama 24 jam. Koloni bakteri yang tumbuh terpisah pada MSA dan BA dilakukan pengamatan morfologi koloni, pewarnaan Gram, uji katalase dan uji biokimia (manitol dan glukosa). Hasil penelitian menunjukkan dari tiga sampel sapi fertil (K1) dinyatakan 66,66% (2 sampel) terdapat bakteri Gram positif kelompok Streptococcus sp dan kelompok Staphylococcus aureus. Dari tiga sampel sapi RB (K2) dinyatakan 100% (3 sampel) terdapat bakteri Gram positif kelompok Streptococcus sp 33,33% dan kelompok Staphylococcus aureus 66,66%. Sapi yang fertil tidak seluruhnya terinfeksi bakteri Gram positif, akan tetapi pada sapi yang mengalami RB seluruhnya positif terinfeksi bakteri Gram positif. Bakteri Gram positif yang paling dominan menginfeksi uterus sapi RB adalah Staphylococcus aureus. This study aims to determine the species of Gram-positive bacteria of aceh cattle utery which experienced repeat breeding. Sample used are six female aceh cattle consisting of 3 fertile cows (K1) and 3 cows which experienced repeat breeding (RB). The samples were taken from cow’s utery using steril swab then culture in nutrient broth (NB) media and incubated at temperature 37 °C for 24 hours then cultured in manitol salt agar (MSA) media and blood agar (BA) media then incubated for 24 hours. The morphology of bacteria colony that grew separately on MSA and BA were observed, Gram stained and katalase and biochemical (mannitol and glucose) test were done. The result of this study showed that from 3 fertile samples (K1), indicated 66.66% (2 samples) contained Gram-positive bacteria from Streptococcus sp group and Staphylococcus aureus group. Three RB samples (K2) showed 100% (3 samples)contained Gram-positive bacteria, 33.33% Streptococcus sp and 66.66% Staphylococcus aureus. The fertil are not entirely infected by Gram-positive bacteria. However, the cow experiencing RB entirely positive infected by Gram-positive bacteria. The most dominant species of Gram-positive bacteria infected utery of aceh cattle with repeat breeding is Staphylococcus aureus.