Penelitian ini bertujuan menghitung jumlah koloni bakteri proteolitik pada rumen sapi aceh, sampel yang digunakan yaitu cairan rumen sapi aceh yang diambil di Rumah Potong Hewan (RPH) Lambaro Aceh Besar. Sebanyak 5 ekor sapi aceh. Sampel dilakukan pengenceran 10-2 sampai 10-6, kemudian diinokulasi ke dalam media Skim Milk Agar dengan metode tuang (pour plate). Selanjutnya cawan Petri dimasukkan ke dalam candle jar kemudian diinkubasi dengan suhu 39°C selama 48 jam. Koloni bakteri proteolitik yang tumbuh kemudian dilakukan pengamatan morfologi koloni (warna, posisi, pinggiran, dan diameter koloni), perhitungan jumlah total bakteri dan pewarnaan Gram. Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat morfologi berwarna putih, dan kuning, posisi di dasar dan di permukaan agar, pinggiran rata dan bergerigi, diameter koloni 0,1 mm sampai 8 mm, bakteri proteolitik berbentuk kokus Gram positif, basil Gram positif dan dan basil Gram negatif. Rata-rata jumlah total bakteri proteolitik pada cairan rumen sapi aceh yaitu 2,87 × 106 CFU/ml.