Penelitian ini bertujuan menghitung jumlah bakteri proteolitik pada retikulum sapi aceh. Sampel yang digunakan yaitu cairan retikulum yang diambil dari Rumah Pemotongan Hewan (RPH) Lambaro, Aceh Besar dari 5 ekor sapi aceh. Sampel yang diperoleh diencerkan dari 10-1 sampai 10-6 dan dibiakkan kedalam media skim milk agar (SMA). Metode yang digunakan untuk isolasi bakteri proteolitik adalah metode tuang (pour plate). Cawan Petri dimasukkan ke dalam candle jar kemudian diinkubasi dengan suhu 39°C selama 48 jam, selanjutnya dilakukan pengamatan morfologi koloni (warna, posisi, pinggiran, dan diameter koloni), penghitungan jumlah koloni bakteri, dan pewarnaan Gram. Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat morfologi koloni bewarna putih, posisi di dalam agar, di permukaan, di dasar, dengan pinggiran koloni rata, diameter koloni 2 mm sampai 5 mm. Rata-rata jumlah bakteri proteolitik pada cairan retikulum sapi aceh adalah 1,7 × 107 CFU/ml. Bakteri proteolitik berbentuk kokus Gram positif, basil Gram positif, dan basil Gram negatif.