ABSTRAK Metode penyimpanan sperma ikan pada suhu dingin telah banyak dilakukan untuk kepentingan penelitian maupun budidaya. Namun, hasil penelitian menunjukkan bahwa penyimpanan sperma dalam waktu yang lama menyebabkan penurunan kualitas sperma. Penambahan antioksidan diharapkan mampu mempertahankan dan meningkatkan kualitas sperma setelah pembekuan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui konsentrasi glutation optimum untuk meningkatkan kualitas sperma ikan seurukan (Osteochilus vittatus). Metode yang digunakan adalah rancangan acak lengkap (RAL) dengan 6 taraf perlakuan dan 3 ulangan. Sperma ikan seurukan diencerkan dalam extender dengan perbandingan 1:20 (sperma:extender), selanjutnya ditambahkan glutation dengan konsentrasi 0; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 dan 0,5 mg/ml. Sperma yang telah dibekukan kemudian diencerkan kembali dan dicampurkan dengan 100 telur yang dipilih secara acak. Pembuahan telur dihitung 6 jam setelah pencampuran sperma dengan telur, sedangkan penetasannya dihitung 60 jam setelah fertilisasi. Hasil uji ANOVA menunjukkan bahwa penambahan glutation ke dalam pengencer berpengaruh nyata (P