Kehamilan melibatkan berbagai perubahan fisiologi, salah satunya adalah sistem saluran kemih. Perubahan fisik yang terjadi pada kehamilan juga mendorong terjadinya Infeksi saluran kemih. Infeksi saluran kemih dalam hal ini bakteriuri asimtomatis pada wanita hamil meningkatkan risiko terjadinya sistitis, pielonefritis, ketuban pecah dini dan persalinan preterm. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui angka insidensi Infeksi Saluran Kemih pada ibu hamil trimester III dengan melakukan pemeriksaan kultur urine. Jenis penelitian ini adalah deskriptif dengan pendekatan cross sectional yang telah dilakukan pada bulan Oktober- November tahun 2016. Sampel pada penelitian ini adalah ibu hamil trimester III yang diambil urin porsi tengah dengan jumlah sampel sebanyak 32 ibu hamil. Kultur urin dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Klinik Rumah Sakit Umum Daerah dr. Zainoel Abidin Banda Aceh, dimana identifikasi bakteri dilakukan dengan alat Vitex-2. Hasil kultur urin dari 32 ibu hamil diperoleh 9 ibu hamil (28.1%) tumbuh bakteri dan 23 ibu hamil (71,9%) tidak tumbuh bakteri. Kesimpulan penelitian ini adanya insidensi ISK asimtomatik pada ibu hamil trimester III di Poli Kebidanan dan Kandungan Rumah Sakit Umum Daerah dr. Zainoel Abidin Banda Aceh diperoleh 28,1%. Bakteri terbanyak sebagai penyebab ISK asimtomatik adalah E. coli. Kata kunci: Kehamilan, trimester III, ISK asimtomatik, kultur urin