Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektivitas beberapa agen antagonis serta cara aplikasinya dalam menekan patogen jamur S. rolfsii pada tanaman kedelai. Penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) Faktorial yang terdiri atas 2 faktor. Faktor pertama adalah jenis agen antagonis dan faktor kedua adalah cara aplikasi. Agen antagonis yang dicobakan yaitu Pseudomonas flourescens, Trichoderma sp., Gliocladium sp. dan Coynebacterium sp. diaplikasikan dengan perendaman kemudian diaplikasikan ke dalam tanah. Hasil penelitian menunjukkan bahwa jenis agen antagonis berpengaruh sangat nyata terhadap masa inkubasi post emergence damping-off, jenis agen antagonis berpengaruh nyata terhadap persentase perkecambahan benih kedelai, persentase benih terserang sebelum muncul ke permukaan tanah (pre emergence damping-off), dan persentase benih terserang setelah muncul ke permukaan tanah (post emergence damping-off) namun agen antagonis tidak berpengaruh nyata terhadap tinggi tanaman dan jumlah daun umur 30 hari dan tidak terdapat interaksi antara jenis agen antagonis dengan cara aplikasinya. Kata kunci: Agen antagonis, S. rolfsii, Kedelai