Penelitian terhadap daun Clausena harmandiana yang telah dilaksanakan di Laboratorium Penelitian Kimia FMIPA, Unsyiah bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri senyawa kimia yang terkandung didalam daun tumbuhan Clausena harmandiana erhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Penelitian ini diawali dengan proses ekstraksi menggunakan pelarut n-heksana, diklorometana dan metanol. Hasil uji antibakteri dari ekstrak kasar n-heksana, diklorometana dan metanol menunjukkan aktivitas terkuat pada ekstrak diklorometana pada konsentrasi 10% dengan zona hambat sebesar 9,8 mm terhadap E. coli dan 9,34 mm terhadap S. aureus. Isolasi senyawa dari ekstrak diklorometana dilanjutkan dengan kromatografi kolom gravitasi dan didapatkan 47 fraksi yang kemudian dianalisis secara kromatografi lapis tipis (KLT) dan didapatkan 5 subfraksi gabungan yaitu fraksi A (F¬¬2-F5), fraksi B (F¬¬6-F13), fraksi C (F¬¬14-F22), fraksi D (F¬¬23-F29) dan fraksi E (F¬¬30-F47). Analisis secara KLT, subfraksi B menunjukan adanya senyawa alkaloid (1,45 g) dan dilakukan rekromatografi menghasilkan 21 fraksi. Analisis secara KLT subfraksi B, F13¬-F16 (0,5 g) menunjukan adanya senyawa alkaloid. Subfraksi B (F13¬-F16¬) diuji antibakteri terhadap bakteri E.coli dan S. aureus menghasilkan zona hambat rata-rata sebesar 7 mm lebih kecil dibandingkan ekstrak diklorometana rata-rata sebesar 8,75 mm dengan konsentrasi yang sama. Kata kunci: Clausena harmandiana, Antibakteri, Escherichia coli, Staphylococcus aureuys