Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh freeze thawing cycles terhadap stabilitas konsentrasi hormon testosteron pada sapi brahman cross (BX). Penelitian ini menggunakan 30 aliquot serum darah dari enam ekor sapi BX. Serum dibagi menjadi lima kelompok perlakuan yaitu kontrol/tidak dilakukan freeze thawing cycles (T0), freeze thawing dua kali (T2), freeze thawing empat kali (T4), freeze thawing enam kali (T6), dan freeze thawing delapan kali (T8) masing-masing dengan enam ulangan. Konsentrasi hormon testosteron diukur dengan teknik ELISA. Data dianalisis menggunakan uji t. Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi hormon testosteron menurun (3,49%, 2,81%, 3,90%, dan 5,97%) dari sampel serum yang mengalami freeze thawing cycles (T2, T4, T6, dan T8) dibandingkan kelompok kontrol (T0). Hasil analisis statistik menunjukkan bahwa konsentrasi hormon testosteron pada T2, T4, dan T6 tidak berbeda dengan T0 (P>0,05), namun konsentrasi hormon testosteron pada T8 berbeda nyata dengan T0 (P