Daun mengkudu (Morinda citrifolia L.) merupakan salah satu tanaman berkhasiat yang dapat mengobati diare. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak metanol daun mengkudu terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan mengetahui besarnya zona hambat yang dihasilkan. Karakterisasi ekstrak metanol daun mengkudu memperoleh kadar air sebesar 24.59% ± 0.5; kadar abu total 15.45% ± 1.22 ; kadar sari larut air 48.56% ± 1.81; dan kadar sari larut etanol 67.31% ± 0.12. Hasil skrining fitokimia menunjukkan ekstrak metanol daun mengkudu mengandung alkaloid, flavonoid, steroid dan saponin. Pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi cakram dengan konsentrasi 10, 25, 40 dan 55%, kontrol positif ciprofloxacin 5 µg dan kontrol negatif pelarut metanol. Hasil pengujian aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun mengkudu tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli.