Bayi yang dirawat di ruang Neonatal Intensive Care Unit (NICU) sangat rentan untuk mengalami Hospital Care-Associated Infection (HCAI). Salah satu cara penyebaran HCAI yang paling sering terjadi adalah melalui udara. Penelitian ini bertujuan untuk menilai indeks kuman dari udara di ruang NICU dan Perinatologi Rumah Sakit Umum Daerah dr. Zainoel Abidin (RSUDZA) Banda Aceh. Jenis penelitian ini adalah observasional laboratorium. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah Metode Passive Air Sampling dengan meletakkan cawan Petri pada tempat terbuka yang berjarak 1 meter dari lantai dan benda disekitarnya selama 1 jam kemudian diinkubasi dan dilakukan penghitungan jumlah koloni yang tumbuh. Jumlah cawan Petri yang digunakan disesuaikan dengan rasio luas ruangan berdasarkan International Organization of Standardization (ISO)14644-1 dan ISO 14698-1, yaitu 23 cawan Petri. Hasil penghitungan jumlah koloni kemudian dikonversi ke dalam satuan CFU/m3 dengan metode Koch (Koch’s Sedimentation Metode) dan dinilai sesuai standar yang ditetapkan berdasarkan Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia No. 1204/Menkes/SK/X/2004 tentang Persyaratan Kesehatan Lingkungan Rumah Sakit. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa indeks kuman ruang NICU dan Perinatologi RSUDZA Banda Aceh yang didapatkan berada di atas ambang batas yang ditoleransi, yaitu di atas 200 CFU/m3. Kata kunci : indeks kuman udara, Neonatal Intensive Care Unit (NICU), Passive Air Sampling.