Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh freeze thawing cycles terhadap stabilitas konsentrasi hormon kortisol pada sapi brahman cross (BX). Penelitian ini menggunakan 30 aliquot serum darah dari 6 ekor sapi BX. Serum dibagi menjadi 5 kelompok perlakuan yaitu kontrol/tidak dilakukan freeze thawing (P0), freeze thawing dua kali (P1), empat kali (P2), enam kali (P3), delapan kali (P4) masing-masing dengan 6 ulangan (aliquot serum). Pengukuran konsentrasi hormon kortisol menggunakan metode Enzym Linked Imunosorbent assay. Data dianalisis menggunakan uji t dengan membandingkan antara kontrol (P0) dengan kelompok perlakuan (P1-P4). Hasil penelitian menunjukkan bahwa serum yang mengalami freeze thawing cycle (P1-P4), kandungan hormon kortisol menurun dan lebih rendah (21.16%-29.57%) dibandingkan P0. Hasil analisis statistik menunjukkan bahwa konsentrasi hormon kortisol pada P1-P4 secara signifikan lebih rendah (P