Human Immunodeficiency Virus (HIV) merupakan retrovirus yang menyerang sel- sel sistem kekebalan tubuh manusia dan menimbulkan Acquired Immuno Deficiency Syndrome (AIDS). Salah satu kendala pengendalian penyakit HIV/AIDS adalah stigma dan diskriminasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui hubungan pengetahuan tenaga kesehatan tentang HIV/AIDS dengan terjadinya stigma dan diskriminasi terhadap orang dengan HIV/AIDS (ODHA) di puskesmas wilayah kota Banda Aceh. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah analitic observational dengan menggunakan desain cross sectional yang dilaksanakan dari bulan Agustus 2015 s/d Februari 2016. Data diperoleh dari Dinas Kesehatan Banda Aceh dan pemberian kuesioner. Analisis data dilakukan secara bertahap meliputi analisis univariat dan analisis bivariat menggunakan uji chi-square. Selama penelitian berlangsung, didapatkan subjek penelitian sebanyak 67 orang, yang terdiri laki-laki sebanyak 8 orang dan perempuan sebanyak 59 orang. Berdasarkan hasil uji statistik dengan chi-square untuk variabel stigma dan diskriminasi menunjukkan nilai probabilitas p(0,000)< α(0,05). Hal ini menunjukkan bahwa distribusi pengetahuan tenaga kesehatan tentang HIV/AIDS, 40 orang baik dan 27 orang kurang. Distribusi stigma dan diskriminasi, ada stigma dan diskriminasi sebanyak 15 orang dan tidak ada stigma dan diskriminasi sebanyak 52 orang. Distribusi frekuensi stigma dan diskriminasi berdasarkan jenis kelamin 3 orang laki-laki dan 12 orang perempuan. Distribusi frekuensi stigma dan diskriminasi berdasarkan pendidikan D-I sebanyak 4 orang dan D-III sebanyak 11 orang. Distribusi frekuensi stigma dan diskriminasi berdasarkan profesi, 6 orang sebagai perawat dan 9 orang sebagai bidan. Di simpulkan bahwa tenaga kesehatan yang berpengatahuan kurang tentang HIV/AIDS cenderung melakukan stigma dan diskriminasi terhadap ODHA sebanyak 11 orang. Kata kunci : HIV/AIDS,Stigma dan Diskriminasi