Bakteri selulolitik yang memiliki kemampuan mendegradasikan selulosa dengan menghasilkan enzim selulase. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui jenis bakteri penghasil enzim selulase pada retikulum sapi aceh, secara PCR-Sekuensing. Sampel cairan reticulumsapi aceh diambil dari RPH lalu dilakukan isolasi untuk mendapatkan bakteri selulolitik pada media selektif, yaitu BHM-CMC agar selanjutnya dilakukan isolasi DNA total untuk mendapatkan DNA murni dari bakteri yang dihasilkan. Kemudian dilakukan amplifikasi gen 16S rRNA dan penentuan urutan DNA. Homologi urutan DNA sampel dengan urutan DNA yang sudah dideposit di Gen Bank dapat diketahui melalui penjajaran urutan DNA sampel dengan data nukleotida di NCBI. Penjajaran dilakukan dengan menggunakan program BLASTN, selanjutnya menggunakan program Custal W MEGA 5. Dapat disimpulkan bahwa spesies bakteri isolat bakteri penghasil enzim selulase memiliki kedekatan dengan bakteri Enterobacter sp. TSASS2 sebesar 87% yang kemungkinan merupakan spesies baru atau spesies ini belum dideposit di GenBank.