Isolasi senyawa antibakteri ekstrak etilasetat kulit batang kamboja putih (Plumeria alba) dimaserasi dengan pelarut etilasetat menghasilkan ekstrak etilasetat 67,00 g (3,35 %). Ekstrak etilasetat dipisahkan menggunakan kromatografi kolom cair vakum (KKCV) dan diperoleh 3 fraksi masing-masing adalah fraksi A (2,5 g), fraksi B (4,0 g) dan fraksi C (2,0 g). Fraksi-fraksi tersebut direkromatografi menggunakan kromatografi kolom gravitasi menghasilkan 47 fraksi A dan 25 fraksi B kemudian direkristalisasi. Sub fraksi A5 dan B3yang membentuk kristal diuji aktivitas antibakteri terhadap bakteri E. coli dan S. aureus dengan menggunakan metode Kirby-Bauer menggunakan cakram dengan konsentrasi 0,1; 0,25 dan 0,5 % masing-masing dengan tiga kali perulangan. Hasil uji aktivitas antibakteri dari sub fraksi A5 pada bakteri S. aureus lebih besar dari pada bakteri E. coli, sedangkan aktivitas antibakteri dari sub fraksi B3 pada bakteri E. coli lebih besar dari pada bakteri S. aureus. Kontrol positif digunakan gentamisin. Senyawa yang diduga dari uji fitokimia dan data IR pada sub fraksi A5 adalah triterpen ester dan pada sub fraksi B3 adalah triterpen alkohol. Kata Kunci : Plumeria alba, ekstrak etilasetat, metabolit sekunder, antibakteri dan karakterisasi menggunakan FTIR.