ABSTRAK Purifikasi dan karakterisasi antibiotik golongan β-laktam dari isolat Pria Laot Sabang 80 telah dilakukan untuk mengetahui pengaruh variasi suhu, pH dan kelarutannya dalam pelarut organik terhadap aktivitas antibiotik yang dihasilkan. Antibiotik dari isolat tersebut diproduksi pada media Tryptone Soy Broth dengan waktu inkubasi 112 jam. Berdasarkan uji ninhidrin, uap iodium dan iodium-kalium iodin dengan metode KLT antibiotik ini menunjukkan golongan β-laktam. Hasil karakterisasi antibiotik dengan metode Kirby-Baeur menunjukkan kestabilan pada suhu 70ºC dan 121ºC dibandingkan pada suhu 4ºC dan 30ºC. Diameter zona hambat paling baik ditunjukkan pada suhu 70ºC terhadap Escherichia coli dan Stapylococus aureus masing-masing 10 mm dan 10,5 mm. Antibiotik ini memiliki stabilitas terbaik pada pH netral yaitu pH 7 dibandingkan pH asam (pH 3) dan pH basa (pH 9). Antibiotik β-laktam dari isolat PLS 80 menunjukkan kelarutan yang baik pada pelarut yang bersifat semipolar (2-propanol) namun tidak larut pada pelarut nonpolar dan polar (asetonitril dan etanol). Berdasarkan uji stabilitas antibiotik β-laktam dari isolat PLS 80 menunjukkan karakter yang stabil pada suhu tinggi, pH netral dan larut dalam pelarut semipolar. Kata kunci: Antibiotik β-laktam, sumber air panas bawah laut, isolat PLS 80, pemurnian antibiotik, stabilitas antibiotik. ABSTRACT Purification and characterization of β-lactam antibiotic from PLS 80 isolate was carried out to determine the effect of temperature variations, pH and it is solubility in organic solvents towards antibiotic activity. Antibiotics was produced in Triptic Soy Broth medium with incubation of 112 hours. Ninhydrin, iodine steam and iodine potassium-iodine spray on TLC plate indicated a β-lactam class of the antibiotic. The characterization the antibiotic using Kirby-Baeur method that is was more stable at 70ºC and 121ºC than at 4ºC and 30ºC. The inhibition zone was best showed at 70ºC with diameter of against Escherichia coli and Stapylococus aureus were 10 mm and 10.5 mm respectively. The antibiotic showed stability on neutral pH (pH 7) but less stable on acidic pH (pH 3) and alkaline pH (pH 9). β-lactam antibiotic from PLS 80 isolate showed good solubility in a semipolar solvent (2-propanol) but less soluble in nonpolar and polar solvents (acetonitrile and ethanol). To conclude, β-lactam antibiotics from PLS 80 isolate was more stable at high temperatures, neutral pH and in semipolar solvent. Keywords: β-lactam antibiotics, underwater hot springs, PLS 80 isolate, purification of antibiotics, antibiotics stability.